La native de Buffalo, dans l'Etat de New York, s'est inclinée 1-6, 6-3, 6-3 contre l'Australienne Kimberly Birrell (83e). Quart de finaliste à Paris en 2022, Pegula n'avait plus été éliminée aussi rapidement à Roland-Garros depuis l'édition 2020 du tournoi, reportée à l'automne en raison de la pandémie de Covid-19.
Birrell n'avait pour sa part jamais remporté de match dans le tableau principal de Roland-Garros. Elle affrontera jeudi au deuxième tour l'Ukrainienne Oleksandra Oliynykova (65e mondiale).